實驗干貨—ELISA實驗顯性淡、靈敏度低是為什么?怎么解決?

　　Elisa 實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。

　　酶聯免疫吸附實驗

　　一、顯色淡，靈敏度偏低

　　可能原因及解決方法：

　　試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平試劑盒未充分平衡衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)樣品一般選擇培養上清、血清、血漿。其他樣品

　　2、樣品不適合做ELISA檢測形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優化檢測的條件(例如稀釋液的成分)

　　3、酶標板在貯存或洗后拍干時過分防止板過于干燥，干燥

　　4、包被抗體遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底

　　5、樣本和抗體孵育條件不合適，按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育

　　6、洗滌浸泡時間過長，按照說明書操作，勿人為增加漫泡時間

　　7、偶聯HRP試劑污染棄去試劑，重新配置

　　8、錯誤的稀釋偶聯HRP試劑棄去試劑，重新配置確定合適的孵育時間:人為判定-最高濃度的標準TMB底物孵育時間過短，因非人。

　　9、品出現深藍色;S4-5有淡藍色;機器判定620n為因素影響，需要優化孵育時間m波長下測定OD值達到0.6-0.65

　　10、樣本濃度過高或存在基質效應建議做不同稀釋倍數，確認樣本最佳稀釋倍數酶標儀濾光片設置有問題或者波

　　11、確認儀器設置及選擇正確的波長檢測長選擇不對不能使用細胞培養板，建議使用ELISA專用高吸

　　12、酶標板不適合做ELISA附力板子

　　二、出現白板，陽性對照不顯色

　　可能原因及解決方法：

　　1、顯色液變質更換新的顯色液

　　2、洗滌液配制有誤請按說明書所示稀釋倍數配制

　　3、未加酶結合物而認為已加入注意不要漏加

　　4、終止液誤作洗滌液稀釋或當底物液使用每次加液前均應看清標簽請按照說明書所示配置說明書，注意

　　5、標準品稀釋方法錯誤/或標準品有問題單位和稀釋倍數，建議使用同批次試劑盒，不能混用不

　　6、不同試劑盒或不同批號的試劑混用，同試劑盒或不同批號的試劑

　　三、不正常的標準曲線

　　可能原因及解決方法：

　　1、錯誤的方法重懸標準品加入正確量的溶液重懸標準品，重懸充分

　　2、標準品稀釋錯誤按照說明書要求稀釋標準品

　　3、標準品污染用一次性的滅菌吸頭，標準品貯存于2-8℃

　　4、錯誤的倍比稀釋步驟按照說明書倍比稀釋標準品TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用，

　　5、波長選擇錯誤而前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優于單波長

　　6、標準品混用不同批號試劑勿混用

　　7、試劑盒在運輸途中時間太盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫長，溫度太高，標準品失ELISA未終止而直接檢測4顯色需終止后檢測，否則會出現620nm比450nm讀

　　8、50nm和620nm數高的現象。

　　四、OD值超出正常范圍

　　可能原因及解決方法：

　　1、錯誤的樣品或標準品的稀釋按照說明書稀釋

　　2、偶聯抗體濃度過高按照說明書調整到最佳的濃度

　　3、TMB底物孵育時間過長調整到合適的孵育時間

　　4、樣品或標準品污染避免污染

　　5、錯誤的孵育時間或溫度按照說明書

　　6、孵育時未加蓋導致溶液揮發和污染 貼封片或加蓋

　　elisa試劑盒本生一直視質量控制為企業的生命，追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業精神作為標準，以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創美好的未來。