酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)原理

　　酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合與酶催化顯色的免疫檢測技術，其核心原理可分為以下關鍵步驟：

　　一、固相載體包被

　　抗原/抗體固定化?

　　將已知抗原或抗體吸附于固相載體(通常為聚苯乙烯微孔板)表面，并保持其免疫活性

　　封閉處理?

　　使用無關蛋白(如BSA)封閉未結(jié)合位點，減少非特異性結(jié)合

　　二、特異性結(jié)合反應

　　樣本孵育?

　　加入待測樣本，目標分子(抗原或抗體)與固相載體上的對應結(jié)合物形成免疫復合物

　　洗滌分離?

　　通過多次洗滌去除未結(jié)合的游離成分，確保反應特異性

　　三、酶標記與信號放大

　　酶標二抗/抗原?

　　加入酶標記的抗體或抗原(如HRP標記)，與目標分子特異性結(jié)合

　　催化顯色?

　　加入底物(如TMB)后，酶催化底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物，顏色深淺與目標物濃度成正比

　　四、檢測與定量

　　光學測量?

　　使用酶標儀測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算目標物濃度

　　靈敏度優(yōu)勢?

　　酶的高效催化作用可放大信號，檢測限可達皮摩爾級別

　　常見方法類型

　　類型 特點 適用場景

　　直接法? 酶標一抗直接結(jié)合抗原，步驟簡單但靈敏度較低 單一抗原檢測

　　間接法? 使用酶標二抗放大信號，提高靈敏度 抗體檢測(如血清學)

　　夾心法? 需兩種特異性抗體分別捕獲和檢測抗原，特異性最高 復雜樣本中的微量抗原

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術老師或供應商。

　　注：實際應用中需根據(jù)檢測目標選擇方法類型，并優(yōu)化包被濃度、封閉條件等參數(shù)。以上資料僅供參考具體請咨詢技術老師或供應商。

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