ELISA實驗原理

　　ELISA(酶聯免疫吸附試驗)是一種基于抗原-抗體特異性結合的免疫檢測技術，通過酶催化底物顯色實現定性或定量分析?。其核心原理包括：

　　固相包被?：抗原或抗體通過物理吸附固定在微孔板表面?。

　　免疫反應?：待測樣本與包被物結合，形成抗原-抗體復合物?。

　　信號放大?：酶標記的二抗或底物催化顯色，通過酶標儀讀取吸光度值?。

　　主要ELISA類型及適用場景

　　類型? ?          原理特點?                                   典型應用?

　　直接ELISA?  抗原直接包被，酶標一抗檢測    病毒顆粒、純化蛋白定量?

　　間接ELISA?  酶標二抗放大信號，靈敏度高    抗體檢測(如HIV、新冠IgG/IgM)?

　　夾心ELISA?  雙抗體夾心結構，特異性強       胞因子(IL-6)、腫瘤標志物(CEA)?

　　競爭ELISA?  標記抗原與樣本抗原競爭結合抗體 小分子檢測(激素、藥物)?

　　關鍵試劑與儀器

　　試劑?：

　　包被緩沖液?(如碳酸鹽緩沖液)?

　　酶標抗體?(HRP或AP標記)?

　　顯色底物?(TMB或OPD)?

　　終止液?(如硫酸)?

　　儀器?：

　　酶標儀(檢測吸光度)?

　　移液器(精確加樣)?

　　洗板機(去除未結合物)?

　　操作步驟(以夾心ELISA為例)

　　包被?：捕獲抗體固定于微孔板，4℃過夜?。

　　封閉?：加入BSA或脫脂牛奶封閉非特異性位點?。

　　孵育?：加入樣本和檢測抗體，37℃孵育1小時?。

　　顯色?：加入TMB底物，避光反應15分鐘?。

　　終止?：加入終止液，酶標儀讀取450nm吸光度?。

　　注意事項

　　樣本處理?：避免反復凍融，離心去除顆粒物?。

　　洗滌?：每次孵育后需洗滌，減少背景信號?。

　　標準曲線?：需設置梯度濃度標準品，確保線性范圍?。

　　注：以上資料僅供參考，具體產品信息請咨詢技術老師或品牌供應商。

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