小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-9418小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒基本信息

　　小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法原理設計，用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿等樣本中的PFN2蛋白濃度。本試劑盒具有高靈敏度(通常≤0.137ng/mL)和良好的特異性，與相似物質無明顯交叉反應?。檢測線性范圍一般為0.312-20ng/mL，精密度批內差CV<10%，批間差CV<12%?。

　　二、試劑盒組成

　　試劑盒主要包含以下組分(以96T規格為例)：

　　預包被酶標板：8×12條(包被PFN2捕獲抗體)

　　標準品：1支(需按說明書稀釋)

　　標準品/樣品稀釋液：15ml

　　生物素化檢測抗體(100×)：1支

　　生物素化檢測抗體稀釋液：12ml

　　SABC復合物：12ml

　　TMB顯色液(A/B)：各6ml

　　終止液：12ml

　　20×濃縮洗滌液：60ml

　　封板膠紙：4張?

　　三、樣本收集與處理

　　1. 樣本類型

　　適用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養上清液及其他生物體液?。

　　2. 樣本采集

　　血清?：使用不含熱原和內毒素的試管收集血液，3000轉離心10分鐘分離血清

　　血漿?：使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉離心30分鐘取上清

　　組織勻漿?：加入適量生理鹽水搗碎后，3000轉離心10分鐘取上清

　　細胞上清液?：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物?

　　3. 樣本保存

　　短期(48小時內)可保存于2-8℃;長期保存需分裝后凍存于-20℃或-80℃，避免反復凍融?。

　　四、實驗操作步驟

　　1. 試劑準備

　　標準品稀釋?：按照說明書進行梯度稀釋(通常為1:2系列稀釋)

　　洗滌液配制?：將20×濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20稀釋?

　　2. 加樣

　　設空白孔(不加樣品及酶標試劑)、標準孔和待測樣品孔

　　標準孔加入50μl標準品

　　待測樣品孔先加40μl樣品稀釋液，再加10μl待測樣品(終稀釋度5倍)

　　加樣時避免觸及孔壁，輕輕混勻?

　　3. 孵育

　　封板后37℃溫育30分鐘?

　　溫育時建議將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，避免液體蒸發?

　　4. 洗滌

　　手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩盡，重復5次

　　最后一次洗滌后在吸水紙上拍干，避免殘留?

　　5. 加檢測抗體

　　每孔加入50μl生物素化檢測抗體工作液(空白孔除外)

　　37℃溫育30分鐘?

　　6. 加酶結合物

　　每孔加入50μl酶結合物工作液

　　37℃避光溫育30分鐘?

　　7. 顯色

　　每孔依次加入50μl顯色劑A和50μl顯色劑B

　　37℃避光顯色10分鐘(需定時觀察顏色變化)?

　　8. 終止反應

　　每孔加入50μl終止液(顏色由藍變黃)

　　15分鐘內完成OD值測定?

　　五、結果計算

　　以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線

　　根據樣品OD值，從標準曲線計算出相應濃度

　　若樣品經過稀釋，需乘以稀釋倍數得到實際濃度?

　　六、注意事項

　　試劑保存?：未開封試劑盒2-8℃保存;使用前室溫平衡20分鐘;濃縮洗滌液結晶屬正常現象，水浴加熱溶解后使用?

　　操作規范?：

　　使用一次性吸頭避免交叉污染

　　不同批次試劑勿混用

　　嚴格按說明書控制溫育時間和溫度?

　　安全防護?：

　　操作時佩戴手套和口罩

　　避免直接接觸終止液和顯色液

　　勿用嘴吸取任何試劑?

　　質量控制?：

　　每次實驗應包含標準曲線和質控樣本

　　回收率應在80-120%之間(血清樣本回收率通常為87-94%)?

　　結果解釋?：

　　本試劑盒僅供科研使用，不用于臨床診斷

　　樣本值超出檢測范圍時需適當稀釋后重測

　　注：以上資料僅供參考，具體產品請咨詢技術老師或是品牌供應商。

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