人白細(xì)胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-1648人白細(xì)胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒

　　以下是關(guān)于人白細(xì)胞介素21(IL-21)ELISA試劑盒的實驗使用說明：

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法檢測樣本中IL-21濃度?。預(yù)包被的捕獲抗體與樣本中IL-21結(jié)合后，再與HRP標(biāo)記的檢測抗體形成復(fù)合物，通過TMB顯色反應(yīng)(藍(lán)色→黃色)測定450nm吸光度，顏色深淺與IL-21濃度正相關(guān)?。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被板?：96孔或48孔(2-8℃保存)?

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：濃度通常為0-320pg/mL或360ng/L(需稀釋)?

　　檢測抗體?：生物素化抗體工作液?

　　顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B液、終止液?

　　洗滌液?：20-30倍濃縮液(使用前需稀釋)?

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：

　　血清：室溫凝固10-20分鐘后，2000-3000×g離心20分鐘?

　　血漿：EDTA/肝素抗凝，3000×g離心15-30分鐘?

　　避免反復(fù)凍融，-20℃分裝保存?

　　細(xì)胞上清/組織勻漿?：

　　細(xì)胞上清：3000×g離心10分鐘?

　　組織勻漿：PBS勻漿后5000×g離心5-10分鐘?

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋(如0-320pg/mL)?

　　加樣孵育?：

　　每孔加100μL樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育90分鐘?

　　洗滌?：手工洗板5次(每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干)?

　　抗體孵育?：

　　加入生物素化抗體工作液100μL，37℃孵育60分鐘?

　　酶結(jié)合物?：

　　加入HRP標(biāo)記抗體100μL，37℃孵育30分鐘?

　　顯色?：

　　加TMB底物100μL，避光顯色15分鐘?

　　終止與檢測?：

　　加終止液100μL，3分鐘內(nèi)測定OD450值?

　　五、注意事項

　　試劑保存?：

　　未開封試劑盒2-8℃保存，開封后板條需密封防潮?

　　顯色劑B需避光，終止液含強酸需謹(jǐn)慎操作?

　　質(zhì)量控制?：

　　每次實驗需包含空白孔(僅加稀釋液)?

　　板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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