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      小鼠α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)
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        小鼠α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)

        本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)小鼠α-GST水平。預(yù)包被抗體的微孔板捕獲樣本中的α-GST,加入生物素標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物,再通過(guò)SABC-辣根過(guò)氧化物酶系統(tǒng)顯色。顯色強(qiáng)度與α-GST濃度成正比,450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。

        二、試劑盒組成

        組分48T規(guī)格96T規(guī)格保存條件

        預(yù)包被酶標(biāo)板8×6條8×12條2-8℃密封

        標(biāo)準(zhǔn)品6管(0-24 U/L)6管(0-24 U/L)2-8℃

        生物素化檢測(cè)抗體60μL(100×)120μL(100×)-20℃

        TMB顯色液各3mL(A/B液)各6mL(A/B液)避光

        終止液6mL12mL室溫

        20×濃縮洗滌液30mL60mL室溫

        三、實(shí)驗(yàn)步驟

        樣本處理

        血清/血漿:采集后離心(3000rpm, 10min),避免溶血,2-8℃保存48小時(shí)或-80℃長(zhǎng)期保存。

        組織勻漿:按0.1g組織加1mL PBS比例冰浴勻漿,離心取上清,稀釋50倍后檢測(cè)。

        檢測(cè)流程

        加樣:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本,37℃孵育90分鐘。

        洗滌:棄液后拍干,每孔加洗滌液200μL,重復(fù)3次。

        顯色:加入100μL酶標(biāo)抗體,37℃孵育30分鐘,加TMB底物避光反應(yīng)15分鐘。

        終止:每孔加50μL終止液,30分鐘內(nèi)測(cè)定OD值。

        四、數(shù)據(jù)分析

        標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(U/L)為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)擬合四參數(shù)曲線。

        樣本計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算α-GST濃度,組織樣本需乘以稀釋倍數(shù)(如50倍)。

        五、注意事項(xiàng)

        樣本要求:避免反復(fù)凍融,高脂樣本需離心去除懸浮物。

        溫度控制:反應(yīng)全程保持37℃,顯色避光防淬滅。

        安全操作:TMB底物具腐蝕性,需佩戴手套操作。

        數(shù)據(jù)驗(yàn)證:建議設(shè)置復(fù)孔,OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)需稀釋重測(cè)。

        注意:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。

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