大鼠白介素27(IL-27)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

　　BS-2900大鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞培養(yǎng)上清中的白介素27(IL-27)。IL-27是由EBI3和p28亞基組成的異源二聚體，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用?。

　　二、檢測原理

　　固相包被?：抗大鼠IL-27單抗預(yù)包被于微孔板。

　　復(fù)合物形成?：樣本中IL-27與包被抗體結(jié)合，加入生物素標(biāo)記的檢測抗體形成夾心結(jié)構(gòu)。

　　酶聯(lián)反應(yīng)?：加入HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合。

　　顯色測定?：加入TMB底物顯色，終止液終止反應(yīng)后，在450nm波長下測定OD值，濃度與OD值呈正相關(guān)?。

　　三、試劑盒組分

　　組分 規(guī)格 儲存條件

　　預(yù)包被微孔板 96孔/48孔 2-8℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉) 6個濃度梯度 -20℃

　　生物素標(biāo)記抗體 100×濃縮液 -20℃

　　HRP標(biāo)記鏈霉親和素 100×濃縮液 -20℃

　　TMB顯色液 避光保存 2-8℃

　　終止液(2M硫酸) 室溫 避光

　　濃縮洗滌液(20×) 需稀釋 室溫

　　樣本稀釋液 即用型 2-8℃

　　四、樣本要求

　　樣本類型?：

　　血清/血漿：EDTA抗凝，離心后取上清。

　　組織勻漿：生理鹽水勻漿，離心取上清。

　　細(xì)胞上清：離心去除細(xì)胞碎片。

　　保存條件?：

　　短期(≤7天)：2-8℃。

　　長期(>7天)：-20℃或-70℃，避免反復(fù)凍融?。

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品配制

　　用樣本稀釋液復(fù)溶凍干標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋至6個濃度梯度(如1000、500、250、125、62.5、0 pg/mL)。

　　2. 加樣與孵育

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌5次，每次300μL洗滌液，拍干。

　　3. 抗體反應(yīng)

　　加入100μL生物素標(biāo)記抗體，37℃孵育60分鐘。

　　洗滌后加入100μL HRP標(biāo)記物，37℃孵育30分鐘。

　　4. 顯色與終止

　　加入90μL TMB底物，避光孵育15-20分鐘。

　　加入50μL終止液終止反應(yīng)?。

　　5. 檢測

　　酶標(biāo)儀450nm波長測定OD值。

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)，OD值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　樣本濃度根據(jù)OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀取，若超出范圍需稀釋后復(fù)測?。

　　七、技術(shù)參數(shù)

　　參數(shù) 指標(biāo)

　　檢測范圍 15.6-1000 pg/mL

　　靈敏度 ≤5.7 pg/mL

　　精密度(批內(nèi)/批間) CV <10%/CV <12%

　　回收率 血清91%、EDTA血漿93%、肝素血漿94%

　　八、注意事項(xiàng)

　　試劑保存?：

　　未開封試劑盒：-20℃保存1年。

　　開封后：4℃保存1周，長期需分裝-20℃。

　　操作規(guī)范?：

　　避免溶血、脂血樣本。

　　洗滌需凈，拍干后立即下一步。

　　終止液為酸性，需防護(hù)皮膚和眼睛?。

　　質(zhì)量控制?：

　　每批實(shí)驗(yàn)設(shè)空白孔和標(biāo)準(zhǔn)曲線，R2需>0.95。

　　樣本稀釋后需重新檢測。

　　九、常見問題

　　OD值過高?：樣本濃度過高，需稀釋。

　　顯色不均?：檢查洗滌或加樣準(zhǔn)確性。

　　線性差?：重新配制標(biāo)準(zhǔn)品或更換試劑?。

　　十、適用范圍

　　本試劑盒僅供科研使用，不可用于臨床診斷?。

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒

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