小鼠(SULT)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

　　BS-9421小鼠(SULT)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中硫酸轉(zhuǎn)移酶(SULT)的活性水平。?僅供科研使用?，不可用于臨床診斷。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　雙抗體夾心法?：微孔板預(yù)包抗小鼠SULT捕獲抗體，樣本中SULT與其結(jié)合后，加入生物素標(biāo)記的檢測抗體形成“抗體-抗原-抗體"復(fù)合物。

　　酶聯(lián)顯色?：加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素，催化底物TMB顯色，顏色深淺與SULT濃度呈正相關(guān)。

　　定量檢測?：酶標(biāo)儀450nm波長測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。

　　三、試劑盒組成

　　組分 規(guī)格(48孔/96孔) 保存條件

　　酶標(biāo)包被板 1×48/1×96 2–8℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品(80U/L) 0.3ml×6管 2–8℃

　　酶標(biāo)試劑(HRP標(biāo)記) 5ml/10ml 2–8℃

　　顯色劑A液 3ml/6ml 2–8℃

　　顯色劑B液 3ml/6ml 2–8℃

　　終止液 3ml/6ml 2–8℃

　　濃縮洗滌液(20×) 15ml/25ml 2–8℃

　　封板膜、密封袋 2片/1個(gè) 室溫

　　四、樣本處理

　　血清/血漿?：

　　室溫靜置10–20分鐘，2000–3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取上清液。

　　避免反復(fù)凍融，建議分裝后-80℃保存。

　　組織勻漿?：

　　組織加入生理鹽水搗碎，1000×g離心33分鐘，取上清液。

　　細(xì)胞上清液?：

　　1000×g離心32分鐘去除顆粒，取澄清液。

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋為6個(gè)濃度點(diǎn)(80–0 U/L)。

　　加樣與溫育?：

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(建議復(fù)孔)。

　　37℃避光溫育90分鐘。

　　洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液浸泡30秒后拍干，重復(fù)3次。

　　顯色與終止?：

　　每孔加入顯色劑A/B液各50μL，37℃避光顯色15分鐘。

　　加入終止液50μL終止反應(yīng)。

　　檢測?：酶標(biāo)儀450nm波長測定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。

　　六、注意事項(xiàng)

　　試劑平衡?：冷藏試劑需室溫平衡15–30分鐘后再使用。

　　操作規(guī)范?：

　　避免氣泡產(chǎn)生，加樣時(shí)貼壁緩慢加入。

　　濃縮洗滌液如有結(jié)晶，可水浴加熱助溶。

　　安全防護(hù)?：

　　終止液含強(qiáng)酸，需佩戴手套操作。

　　實(shí)驗(yàn)區(qū)域禁止飲食、吸煙。

　　質(zhì)量控制?：

　　每板需設(shè)空白孔和標(biāo)準(zhǔn)曲線孔。

　　板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)<10%。

　　七、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(U/L)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制四參數(shù)擬合曲線。

　　樣本濃度=曲線方程OD值代入結(jié)果×稀釋倍數(shù)。

　　八、保存與有效期

　　未開封試劑盒：2–8℃保存6個(gè)月。

　　已開封酶標(biāo)板：密封袋裝2–8℃保存≤1個(gè)月。

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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